한국산 겨우살이 렉틴에 의한 지방다당질 유도 인터루킨‐12 발현 조절에 관한 연구
Regulation of LPS‐induced IL‐12 Production by Korean Mistletoe Lectin‐C
- 주제(키워드) 겨우살이 , 렉턴 , 지방다당질
- 발행기관 한동대학교 대학원
- 지도교수 송성규
- 발행년도 2011
- 학위수여년월 2011. 2
- 학위명 석사
- 학과 및 전공 일반대학원 생명과학과
- 세부전공 생명과학
- 원문페이지 vi, 25p
- 실제URI http://www.dcollection.net/handler/handong/000001105592
- 본문언어 한국어
- 저작권 한동대학교 논문은 저작권에 의해 보호받습니다.
초록/요약
기존의 연구들에서 한국산 겨우살이 렉틴‐C의 다양한 생물학적 기능들이 알려져 있고, 특히 점막면역보조제로서의 가능성이 보고되어 있다. 우리는 Th2 사이토카인의 억제조절자인 인터류킨‐12를 조절하는 한국산 겨우살이 렉틴의 기능에 대하여 발견하였다. 지방다당류와 한국산 겨우살이 렉틴‐C를 함께 처리한 쥐 대식세포에서 시간과 렉틴의 농도 의존적으로 IL‐12의 분비량이 감소하는 것을 볼 수 있었다. 이러한 IL‐12의 저해현상은 전사 단계에서 일어나지 않는다. 효소결합면역흡착검사를 이용한 전체 세포 내 단벡질의 분석은 이러한 저해현상이 번역 단계에서 일어나지 않는다는 것을 보여주었다. 단백질 분비를 막거나 막지 않은 대식세포의 세포 용해물을 단백질흡입법으로 분석한 결과 전체 발현양은 p35, p40 소단위가 유사하였으나, 발현 형태는 다른 양상을 보였다. 지방다당류와 한국산 겨우살이 렉틴‐C을 동시에 복강에 처리한 쥐의 경우, 체외실험과 유사하게 혈청내의 인터류킨‐12 분비량이 감소하는 것을 볼 수 있었다. 이 자료들은 한국산 겨우살이 렉틴‐C에 의한 IL‐12 p70와 p35, p40 소단위의 발현조절을 보여주고 있다. 이 연구는 한국산 겨우살이 렉틴‐C의 점막면역보조제로서의 작용기전에 대한 이해를 증진시키고 있다.
more초록/요약
There are various reports for biological function of Korean mistletoe lectin‐C (KML‐C), especially, previous research shows function for potent mucosal vaccine adjuvant. We figure out KML‐C regulates production of LPS‐induced interleukin (IL)‐12, a major Th2 counterregulatory cytokine. Mouse macrophage which was treated LPS and KML‐C at the same time shows the decrease of IL‐12 production time and KML‐C dose dependent manner. This suppression doesn’t occur at the transcription level. Analysis of total intracellular protein by ELISA shows that translation isn’t a reason of this phenomenon. Total cell lysate immunoblotting for protein secretion blocked or non‐blocked macrophage shows that same expression level of each subunit; IL‐12 p35 and IL‐12 p40 but differential secretion pattern. LPS and KML‐C co‐challenge into mouse peritoneal reduced serum levels of IL‐12 as ex vivo macrophage experiments. These data demonstrate regulation of LPS‐induced IL‐12 p70 and p35, p40 subunits by KML‐C. This research gives further understanding for mechanism for mucosal adjuvant effect of KML‐C.
more목차
Abstract i
국문초록 iii
CONTENTS iv
List of Figures vi
I. Introduction 1
II. Materials and Methods 3
1. Mice 3
2. Preparation of KML‐C 3
3. Isolation and Activation of Mouse Peritoneal Macrophage 4
4. RNA isolation, RT‐PCR and Real Time RT‐PCR 5
5. Preparation of Cell Lysates 6
6. Immunoblotting 6
7. ELISA 7
8. Mouse in Vivo Challenge 8
III. Results 9
1. Suppression of IL‐12 production by KML‐C 9
2. Suppression of IL‐12 production is not due to transcription 12
3. Suppression of IL‐12 is not due to translation and dimerization 15
4. Differential translation of IL‐12 p35 and IL12 p40 subunits 17
5. Suppression of IL‐12 production in vivo 19
IV. Discussion 21
V. References 23
Acknowledgement 1